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除四害公司消毒化学因素

　　乙二胺四乙酸(EDTA)、二氯二苯基三氯乙烷(DDT)、苯甲基磺酰氟(PMSF)和对氯汞苯甲酸(PC- MB)对溶葡萄球菌酶没有显着影响;8^+、“112+、0^+、“^+能不同程度地抑制溶葡萄球菌酶活性，而 Zn2+则有一定的活性促进效应。Zn2+这种影响可能和该酶是含锌蛋白有关。表面活性剂、增溶剂对溶

　　葡萄球菌酶的影响，除十二烷基硫酸钠(SDS)能使酶失效外，其余几种增溶剂似乎都有利于溶葡萄球菌酶的作用。

　　(4) **物

　　**物对溶葡萄球菌酶的影响，在菌悬液中含有25%和50%小牛血清，对该消毒剂25%稀释浓度杀灭金黄色葡萄球菌作用有轻度影响，但其杀菌活性，还可以达到99.9%。

　　(5) 除四害公司消毒协同作用

　　溶菌酶可以与多种因子协同，拓宽杀菌谱，增强杀菌效果，溶菌酶与抗体、补体协同作用，可杀灭革兰氏阴性菌。过氧化氢、维生素C、EDTA、三氧乙酸、丙酮、表面活性剂、乳铁蛋白、或酸、碱、加热、冰冻等处理，可使许多对溶菌酶有抗性的细菌容易溶解，革兰氏阴性菌更为明显。例如，添加碱的溶菌酶可使不少抗性菌株(沙门菌、志贺菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等)充分溶解。氨基酸的衍生物，如N-硬脂酸基 谷氨酸、棕榈酸基天冬酰胺，可增强鸡卵白溶菌酶对革兰氏阴性的作用，植酸钙、氨基酸、**酸等可增强鸡卵白溶菌酶的作用，而甲基纤维素纳、果胶、琼脂等则削弱其作用。

　　除四害公司消毒杀灭微生物的机理

　　溶葡萄球菌酶属水解酶中的肽链内切酶，具有特异性水解细菌胞壁肽聚糖交联结构Gly五肽桥联 的作用。由于Gly五肽桥联结构主要存在于葡萄球菌细胞壁，其中又以金葡菌细胞壁中分布较广，因而此酶主要针对葡萄球菌尤其金葡菌表现杀菌作用。

　　溶菌酶可通过水解细胞壁和外膜层中肽糖中的糖苷键(N-乙酰氨葡萄糖与iV-乙酰壁酸间的 p-l，4键、肽键如D-Ala与Lys间肽键等)和酰胺键(如N-乙酰壁酸与Ala间酰胺键等)，使细菌细胞壁 网状结构破坏，胞壁溶解而死亡。‘

　　在溶菌酶对葡萄球菌溶菌过程中，溶葡萄球菌酶的加入表现明显的增强效应。这种“加强效应”的实质是由于溶葡萄球菌酶处理后为溶菌酶的作用创造了条件，而不是直接加强溶菌酶的活性。

除四害公司消毒标准曲线的制备

　　酶B标准曲线的测试操作程序见表2-12。

　　表2-12标准曲线的制备程序

　　管 号012345

　　1%?1.2%底物/mL500500500500500500

　　磷酸 PBS/j^L500480*460440420400

　　37 °C，水浴 3 min?5 min

　　酶B标准液“L

　　摇匀，37 °C，15 min

　　终止剂“L1 0001 0001 0001 0001 0001 000

　　离心10 000 r/min，8 min，取上清以0号管作空白于波长540 nm，l cm光径，狭缝2检测。绘制标 准曲线。用3个不同的标准管，采用相同的浓度连续测定3次，计算同一加样量对应的3个吸光度的平 均值。再作出此底物对应的标准曲线。此曲线可连续使用。底物使用2个?3个月后或更换底物均需重做曲线。

　　4)除四害公司消毒待测溶液酶活性的测定

　　试样经适量稀释，方法步骤与上述标准曲线制作过程相同，加样量一般在100 根据待测溶液

　　的光吸收值(A)-标准曲线上查出对应的酶活性单位数，即可计算出待测溶液的酶活性。

　　5)测定结果的计算

　　试样中溶菌酶的酶活性可按下式计算：

　　式中：C一样品中的酶活性，U/mL;

　　A—本方法检测的酶的含量，U

　　V—实际加样量，mL;

　　X一样品中溶菌酶的含量，%。

　　样品测定也需做3次平行测定。通常3次测定的样品均需分别做3次稀释。3次测定可在同一试验中进行，也可分3次试验进行。

　　6)测定方法的准确度和精密度

　　应用本方法测定酶活性的相对误差<15%，3次测定相对标准偏差不**过±15%。

　　(2)溶葡萄球菌酶的测定方法

　　1) 原理

　　溶葡萄球菌酶的定量检测用比色法，以偶联KNR艳蓝染料的金黄色葡萄球菌菌体死细胞壁为色源底物，根据酶作用过程中定量地释放的带有KNR染料基团的小分子可溶性片段产物，在除去未反应 的不溶性底物后，对反应上清液进行比色测定，以求知酶的活性。此法简便易行，灵敏直观。